SYBR Green I(10000×)電泳用

SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析，操作簡單：無須脫色或沖洗。SYBR Green I 與dsDNA結(jié)合熒光信號(hào)會(huì)增強(qiáng)800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低。可適用于多種電泳分析。（SYBR GreenⅠ的zui低檢出限：20pg DNA(254nm);60pg DNA(300nm 紫外透射)；此外，SYBR®GreenⅠ還可以用于檢測(cè)寡核苷酸(1-2ng,300nm 紫外透射)，比EB靈敏20至100倍。）SYBR Green I適合于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠，聚丙烯酰胺凝膠電泳，脈沖電場(chǎng)凝膠電泳，和毛細(xì)管電泳等。SYBR Green I與雙鏈DNA的親和力非常高，因此可以用做電泳前染色，對(duì)分子生物學(xué)中常用的酶（如：Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用。另外，SYBR Green I與EB相比，誘變能力大大降低。

SYBR Green I核酸染料特點(diǎn)

高靈敏：至少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。

信噪比高：樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低。

操作簡單：無須脫色或沖洗。

適用范圍廣：可適用于多種電泳分析。

使用方便：不影響其它修飾酶作用。

安全性高：分子克隆上明確誘變能力很低

使用方法

SYBR Green I預(yù)染方法

1.       該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳

2.       工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的SYBR GreenⅠ稀釋100倍，即為SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一個(gè)月以上。

3.       制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。

4.       樣品染色：向分析樣品中加入SYBR GreenⅠ工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使SYBR GreenⅠ與樣品中DNA充分結(jié)合。SYBR GreenⅠ工作液加入量為總上樣量的1/10。

5.       DNA Marker染色：將5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混勻，室溫放置5分鐘，使SYBR GreenⅠ與DNA充分結(jié)合。（商品Marker稀釋2-5倍后再電泳，否則電泳條帶會(huì)變形，特別是大片段。）

6.       上樣、電泳：按常規(guī)操作。

SYBR Green I后染方法

1.       按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。

2.       用PH=7.0-8.5的緩沖液（如：TAE，TBE或TE），按照10000：1的比例稀釋SYBR GreenⅠ濃縮液，混勻，制成染色溶液。

3.       將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中，放入凝膠，用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10-30分鐘，染色時(shí)間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色，將配好的工作溶液輕輕地倒在膠板上，讓工作液均勻地覆蓋整個(gè)膠板，并染色30分鐘。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理（避免染料吸附在玻璃表面上）。

4.       用紫外儀觀測(cè)。

SYBR Green I使用注意事項(xiàng)

1.       在"SYBR GreenⅠ預(yù)染色方法"中，電泳時(shí)間不要超過2小時(shí)，否則SYBR GreenⅠ會(huì)從DNA上分離出來，會(huì)產(chǎn)生彌散狀條帶。

2.       在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中，SYBR Green I可以全部從雙鏈核酸上去掉。

3.       如果想對(duì)用 SYBR Green I 染過的膠進(jìn)行Southern blots，建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入0.1%- 0.3%的SDS。

4.       在紫外照射透視下，與雙鏈DNA接合的SYBR Green I呈現(xiàn)綠色熒光。如果膠中含有單鏈DNA則顏色為橘黃而不是綠色。

5.       SYBR Green對(duì)玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。