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MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒
更新時間:2016-04-07   點擊次數(shù):2043次

MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介:

MTT比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法 MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。MTT檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色Formazan并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。在特定溶劑存在的情況下,可以被*溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測定570nm波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快,則吸光度越高;細胞毒性越大,則吸光度越低。

NobleRyder MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒采用了NobleRyder自主研發(fā)Formazan solvent,使檢測本底低,靈敏度高,線性范圍寬。

產(chǎn)品組成

名稱/編號

C0290

500T

Storage

試劑(A):MTT solution(5mg/ml)

5mll

-20 避光

試劑(B):Formazan solvent

60ml

RT

使用說明書

1

 

自備材料:

1、細胞培養(yǎng)液

2、胰蛋白酶消化液

3、低速離心機

496孔培養(yǎng)板

5、細胞計數(shù)板或計數(shù)器

6、細胞培養(yǎng)箱

7、搖床

8、顯微鏡

9、酶聯(lián)免疫檢測儀

 

操作步驟(僅供參考)

1、細胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對數(shù)生長期,常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細胞(懸浮細胞無需消化)。

2、低速離心,收集細胞沉淀。

3、用培養(yǎng)液重懸細胞沉淀,制備成單細胞懸液,并計數(shù)。

4、細胞接種于96孔培養(yǎng)板,一般接種密度為300010000個細胞/孔。通常細胞增殖實驗每孔加3000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入6000個細胞。具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定。

5、37 5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)或按照實驗具體需要進行培養(yǎng),一般培養(yǎng)624h。

6、按照實驗具體要求,給予020μl干預(yù)藥物處理,37 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)至合適時間。

7、棄培養(yǎng)液,每孔加入10μl MTT solution100μl新鮮培養(yǎng)液,在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4h。

8、棄培養(yǎng)液,每孔加入110μl Formazan solvent,置搖床上低速振蕩10 min,使結(jié)晶物充分溶解。如果紫色結(jié)晶較小或較少,溶解的時間會短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多,溶解的時間會長一些。

9、在酶聯(lián)免疫檢測儀570nm測定各孔吸光度。

 

注意事項:

1、MTT solution盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù),當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時,請勿使用。

2、由于使用96孔板進行檢測,如果細胞培養(yǎng)時間較長,應(yīng)注意蒸發(fā)問題。

3MTT solution 在低溫情況下會凝固,置于室溫或2025℃水浴至全部融解后使用。

4、Formazan solvent可以-20℃儲存,當(dāng)產(chǎn)生沉淀或凝固時可以37℃水浴孵育以促進溶解,并且必須在全部溶解并混勻后使用。

5、觀察formazan是否*溶解,亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。

6、培養(yǎng)細胞時盡量細菌避免污染。

7、應(yīng)注意設(shè)立OD調(diào)零孔和對照。

8、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

有效期:12個月有效。

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